Þróun óbeinnar ELISA aðferðar til að greina bráðan niðurgangsheilkenni kórónavírus IgG mótefnis byggt á raðbrigða topppróteini

Bráð niðurgangsheilkenni svína Coronavirus (SADS-CoV) er nýuppgötvuð sjúkdómsvaldandi kórónavírus í svíni sem getur valdið vatnskenndum niðurgangi hjá nýfæddum grísum og valdið verulegu efnahagslegu tjóni fyrir svínaiðnaðinn.Sem stendur er engin hentug sermisfræðileg aðferð til til að meta virkni SADS-CoV sýkingar og bóluefnis, svo það er brýn þörf á að nota skilvirka ensímtengda ónæmissogandi prófun (ELISA) til að bæta upp fyrir þennan skort.Hér var raðbrigða plasmíð sem tjáir SADS-CoV spike (S) prótein sameinað IgG Fc léni úr mönnum smíðað til að framleiða raðbrigða bakúlóveiru og tjáð í HEK 293F frumum.S-Fc próteinið er hreinsað með próteini G plastefni og viðheldur hvarfgirni með Fc og and-SADS-CoV mótefnum gegn mönnum.Síðan var S-Fc prótein notað til að þróa óbeina ELISA (S-iELISA) og fínstilla hvarfskilyrði S-iELISA.Þar af leiðandi, með því að greina OD450nm gildi 40 SADS-CoV neikvæðra sermi staðfest með ónæmisflúrljómunarprófi (IFA) og Western blotting, var skerðingargildið ákvarðað vera 0,3711.Fráviksstuðullinn (CV) 6 SADS-CoV jákvæðu sermisins innan og á milli S-iELISA keyrslur var allt undir 10%.Krosshvarfsprófið sýndi að S-iELISA hefur enga víxlunarvirkni við önnur svínaveirusermi.Að auki, miðað við greiningu 111 klínískra sermissýna, var heildarsamviljahlutfall IFA og S-iELISA 97,3%.Veiruhlutleysingarprófið með 7 mismunandi OD450nm gildum af sermi sýndi að OD450nm gildið sem greindist með S-iELISA hafði jákvæða fylgni við veiruhlutleysingarprófið.Að lokum var S-iELISA gerð á 300 sermisýni úr svínabúi.Auglýsingasett af öðrum svínum enteroveirum sýndu að IgG jákvæð hlutfall SADS-CoV, TGEV, PDCoV og PEDV var 81,7%, 54% og 65,3%, í sömu röð., 6%, í sömu röð.Niðurstöðurnar sýna að S-iELISA er sértækt, viðkvæmt og endurskapanlegt og hægt að nota það til að greina SADS-CoV sýkingu í svínaiðnaðinum.Þessi grein er vernduð af höfundarrétti.allur réttur áskilinn.


Birtingartími: 22. júní 2021